Detección de Brucella spp. por un sistema inmunocromatográfico comercial, en muestras ambientales cubanas / Detection of Brucella spp using a commercial system in enviroment cuban samples

Introducción: actualmente en Cuba se desconoce la circulación de las especies de Brucella en el medio ambiente, por la inexistencia de métodos de laboratorio que permitan su identificación. Objetivos: detectar Brucella spp. en muestras ambientales cubanas aplicando un sistema inmunocromatográfico comercial. Métodos: se estudiaron 59 muestras ambientales de una zona endémica de brucelosis bovina y 50 muestras ambientales de zonas controladas de la enfermedad, durante el período diciembre de 2011 y hasta febrero de 2012. Se utilizó el sistema inmunocromatográfico directo de flujo lateral para Brucella spp. comercializado en Cuba. Resultados: el 52,5 por ciento (31/59) de las muestras ambientales de la zona endémica resultaron positivas para Brucella spp. Las muestras ambientales que presentaron el mayor porcentaje de positividad fueron el estiércol (62,5 por ciento ) y las del suelo cementado (26,9 por ciento ). Predominaron las reacciones fuertemente positivas en un 74,1 por ciento (23/31). Conclusiones: el sistema inmunocromatográfico comercial detecta un elevado porcentaje de Brucella spp. en muestras ambientales de la zona endémica cubana, lo que pudiera avalar su implementación en la red de laboratorios de Salud Pública y del Instituto de Medicina Veterinaria de Cuba. Los resultados de esta investigación deben complementarse con los aislamientos de brucelas en el medio ambiente, pacientes humanos y en animales(AU)

Introduction: Information about the circulation of Brucella species in the Cuban environment is not currently available due to the lack of laboratory methods for their identification. Objectives: Detect Brucella spp. in Cuban environmental samples using a commercial immunochromatographic system. Methods: A study was conducted of 59 environmental samples from an endemic zone for bovine brucellosis and 50 environmental samples from areas where the disease has been controlled, from December 2011 to February 2012. Use was made of the direct lateral flow immunochromatographic system for Brucella spp. commercially available in Cuba. Results: Of the environmental samples from the endemic zone 52.5 percent (31/59) tested positive for Brucella spp. The environmental samples showing the highest positivity were those taken from dung (62.5 percent) and cemented soil (26.9 percent). Strongly positive reactions predominated in 74.1 percent (23/31) of the samples. Conclusions: The commercial immunochromatographic system used detected a high percentage of Brucella spp. in environmental samples from the endemic zone, which could justify its implementation in the Public Health laboratory network and the Institute of Veterinary Medicine of Cuba. The results obtained should be complemented with Brucella isolates from the environment, human patients and animals(AU)

Detección de anticuerpos IgM contra leptospiras por un sistema comercial ELISA-IgM / Detection of IgM antibodies to leptospires by using a commercial ELISA-IgM system

Introducción: la leptospirosis humana es una zoonosis sistémica y transmisible producida por bacterias invasivas del complejo Leptospira interrogans sensu lato. Numerosos métodos se utilizan para el serodiagnóstico de esta entidad clínica, dentro de los cuales se encuentra ELISA. Objetivos: aplicar un nuevo sistema serológico comercial de ELISA, para la pesquisa de anticuerpos IgM contra leptospiras e identificar los serogrupos de leptospiras presentes en los sueros positivos por este sistema. Métodos: de pacientes sospechosos de leptospirosis se estudiaron 27 y 61 sueros con anticuerpos contra leptospiras y sin estos, respectivamente. La técnica de microaglutinación con antígenos vivos (MAT) se utilizó como método de referencia. Los sistemas comerciales de SD Leptospira ELISA-IgM, SD flujo lateral Leptospira IgM y la hemoaglutinación indirecta (HAT) fueron comparativamente empleados. Resultados: 27 sueros con anticuerpos contra leptospiras resultaron positivos por SD Leptospira ELISA-IgM, 20 por SD flujo lateral Leptospira IgM y 9 por hemoaglutinación indirecta. De 61 sueros sin anticuerpos contra leptospiras, 9 y 8 resultaron positivos, respectivamente, por SD Leptospira ELISA-IgM y por SD flujo lateral Leptospira IgM. Los serogrupos Ballum y Canicola predominaron en los sueros positivos por el sistema comercial. La coincidencia entre SD Leptospira ELISA-IgM y la técnica de microaglutinación con antígenos vivos fue de 89,77 porciento. Conclusiones: SD Leptospira ELISA-IgM muestra una mayor positividad en los sueros estudiados, lo que avalaría su posible introducción en Cuba. Se confirma la amplia reactividad del antígeno usado en SD Leptospira ELISA-IgM, lo cual sugiere mantener una activa vigilancia de laboratorio sobre los serogrupos de leptospiras, a nivel nacional

Introduction: human leptospirosis is a communicable systemic zoonosis caused by the invasive bacteria Leptospira interrogans sensu lato complex. Numerous methods are used for serodiagnosis of this disease, including the ELISA tests. Objectives: to implement a new commercial serological ELISA test (SD Leptospira ELISA-IgM, SD Bioline, Korea) for screening of IgM antibodies and for identification of Leptospira serogroups in positive sera. Methods: twenty seven and sixty one sera, with/without IgM antibodies to leptospires, respectively, were studied. They had been taken from patients suspected of having leptospirosis. The microscopic agglutination test with live antigens (MAT) was the reference method. In addition, other commercial systems such as SD Leptospira IgM Lateral Flow and indirect hemagglutination (HAT) tests were comparatively used. Results: all the 27 sera with antibodies against Leptospira were positive according to SD Leptospira ELISA-IgM, 20 sera were found positive by SD Lateral Flow Igm test and 9 sera by the indirect HAT test. Of the 61 sera without antibodies to leptospires, 9 and 8 were positive by SD Leptospira ELISA-IgM and SD Leptospira IgM Lateral Flow test, respectively. Serogroups Canicola and Ballum were predominant in positive sera tested by the commercial system under evaluation. The agreement coefficient between SD Leptospira ELISA-IgM and MAT was 89.77 percent. Conclusions: SD Leptospira ELISA-IgM showed higher positivity rate than the other systems in the studied sera; this aspect would support its possible introduction in Cuba. The great reactivity of the antigen used in the system was confirmed, which indicates that active laboratory surveillance of leptospiral serogroups should be kept nationwide

Detección de ADN de leptospiras en tejidos frescos de fallecidos en Cuba, 2008-2011 / Detection of leptospiral DNA in fresh tissues from dead people in Cuba, 2008-2011

Introducción: la leptospirosis como importante zoonosis reemergente a nivel mundial presenta una mortalidad asociada entre 15 y 25 porciento. El diagnóstico postmortem de esta enfermedad es laborioso. Diferentes métodos moleculares se utilizan en su confirmación, entre ellos la reacción en cadena de la polimerasa. En Cuba, desde 2008 se realiza el diagnóstico molecular de los fallecidos con sospecha de leptospirosis en el Laboratorio Nacional de Referencia de Leptospiras del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí (LNRL-IPK

Introduction: leptospirosis is an important re-emerging zoonosis worldwide, with an associated mortality ranging 15-25 percent. Post-mortem diagnosis of the disease is painstaking. Different molecular methods for diagnosis of leptospirosis have been implemented. In Cuba, the National Reference Laboratory for Letospires of Pedro Kourí Institute of Tropical Medicine (LNRL-IPK

Sistemas serológicos rápidos utilizados para la pesquisa de leptospirosis humana en Cuba / Rapid serological diagnosis systems for human leptospirosis screening in Cuba

Introducción: la leptospirosis humana necesita de un diagnóstico microbiológico rápido y oportuno por ser una enfermedad letal y frecuente en todo el mundo. Objetivo: incrementar la calidad del diagnóstico microbiológico de esta infección, ampliar el conocimiento sobre la circulación de serogrupos de leptospiras en Cuba y demostrar la utilidad de un sistema de aglutinación con partículas de látex cubano y los sistemas inmunocromatogénicos comerciales LEPTO Dipstick, Lepto Tek Lateral Flow, Lepto Tek Dri Dot y SD Leptospira IgM-IgG. Métodos: en esta investigación descriptiva se utilizaron sueros de casos controles positivos y negativos para evaluar y medir el valor diagnóstico de los sistemas serológicos rápidos con respecto al método de referencia de microaglutinación (MAT). Todas las técnicas utilizadas en este reporte aparecen descritas en el Manual de Operaciones y Procederes del Laboratorio de Leptospiras, del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Resultados: todos los sistemas estudiados presentaron aceptables valores de sensibilidad, especificidad y concordancia en comparación con el método de referencia internacional de microaglutinación con microrganismos vivos. Se constató la amplia selectividad (reactividad antigénica) y la fiabilidad diagnóstica de los sistemas, se destacan en particular el látex mezclado de producción nacional, el LEPTO Dipstick y el SD Leptospira IgM-IgG. Conclusiones: ninguno de los procedimientos utilizados fue superado en cuanto a su sencillez, rapidez, simplicidad técnica y grado de ejecución al comparárseles con los métodos tradicionales, incluido el de referencia, y todos resultaron útiles en la pesquisa de anticuerpos frente a leptospiras.

Introduction: human leptospirosis requires rapid and early microbiological diagnosis since it is a common lethal disease worldwide. Objectives: to increase the quality of microbiological diagnosis of this infection, to expand the knowledge on the circulation of groups of leptospiras in Cuba and to show the benefits of an agglutination assay using Cuban latex particles and of commercial immunochromatogenic systems LEPTO Dipstick, Lepto Tek Lateral Flow, Lepto Tek Dri Dot and SD Leptospira IgM-IgG. Methods: this descriptive research used sera from positive and negative control cases to evaluate and measure the diagnostic value of rapid serological diagnosis systems with respect to the microagglutination method of reference (MAT). All the techniques used in this report are described in the Manual of Operations and Procedures of the Leptospira Lab in "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine. Results: all the studied diagnosis systems exhibited acceptable values of sensitivity, specificity and agreement when compared to the international microagglutination method of reference with live microorganisms. The great selectivity (antigen reactivity) and the diagnostic reliability of the diagnostic systems were confirmed; particularly the mixed Cuban-made latex, the LEPTO Dipstick and the SD Leptospira IgM-IgG. Conclusions: the procedures used in this research work exceeded the traditional methods including the microagglutination method of reference in terms of easiness, rapidity, technical simplicity and level of performance, and all were useful for the screening of antibodies to leptospiras.

Confirmación microbiológica de 2 brotes emergentes de leptospirosis humana en Cuba / Microbiological confirmation of two emergent outbreaks of human leptospirosis in Cuba

Se estudiaron muestras clínicas de 293 pacientes con sospechas de leptospirosis, para la confirmación microbiológica de estos eventos, durante los meses de octubre-diciembre de 2005 cuando se produjeron en Cuba 2 brotes epidémicos en humanos. Se analizaron sueros de pacientes, tanto en la fase aguda como convaleciente, así como hemocultivos realizados antes del comienzo del tratamiento con antibióticos. Para el diagnóstico serológico se emplearon técnicas convencionales (hemaglutinación pasiva y microaglutinación de serogrupos) y de avanzada o de diagnóstico rápido (Lepto tek Dri-Dot, Lepto-Cuba, Látex-India, Lepto tek Lateral Flow). Dentro del brote I se confirmaron por las pruebas serológicas 26 por ciento (22/84) de los individuos estudiados, y a partir de hemocultivos 25 por ciento (5/20), mientras que en el brote II se confirmaron serológicamente 48 casos de 162 estudiados (30 por ciento), y se obtuvo aislamiento de leptospiras en 6 casos de 27 procesados (22 por ciento). Las principales serovariedades encontradas serológicamente fueron Canicola, Ballum, Icterohaemorrhagiae y Pomona. Los métodos de diagnóstico rápido fueron herramientas útiles como pesquisa en los casos más graves o de edad pediátrica. Se confirmó que la causa de los 2 eventos epidemiológicos ocurridos fue la infección por leptospiras patógenas, lo que contribuyó a la toma de medidas higiénico-sanitarias en las 2 provincias.

Clinical samples from 293 patients with suspicion of leptospirosis were studied for the microbiologic confirmation of these events, in October-December 2005, when there were 2 outbreaks in humans, in Cuba. Sera samples of patients in acute phase and during convalescence, as well as hemocultures performed before the beginning of the antibiotic therapy, were analyzed. Conventional techniques (passive hemagglutination test and serogroups hemagglutination), and advanced or fast diagnosis techniques (Lepto tek Dri-Dot, Lepto-Cuba, Latex-India, Lepto tek Lateral Flow) were used for serologic diagnosis. In outbreak I, 26 percent of the studied cases were confirmed by serological tests (22/84), and 25 percent (5/20) through hemocultures; whereas in outbreak II, 48 of the 162 studied cases (30 percent) were serologically confirmed, and it was possible to obtain isolation of leptospires in 6 of the 27 processed cases (22 percent). The main serovariants found by serology were canicola, ballum, icterohaemorrhagiae, and pomona. The rapid diagnosis methods were useful screening tools in the most severe cases or at pediatric ages. The two epidemiologic events were caused by pathogenic leptospires infection, which contributed to the adoption of hygienic-sanitary measures in both provinces.

Reactogenicidad e inmunogenicidad de la vacuna cubana inactivada trivalente contra la leptospirosis humana según diferentes esquemas / Reactogenecity and immunogenecity of Cuban trivalent inactivated vaccine against human leptospirosis in different vaccination schemes

Se realizó un ensayo clínico controlado y aleatorizado, con el objetivo de evaluar la reactogenicidad e inmunogenicidad de la vacuna cubana trivalente contra la leptospirosis humana (vax-SPIRAL) en grupos de voluntarios sanos con la utilización de diferentes esquemas de vacunación. Se empleó como control una vacuna de procedencia rusa. Las reacciones adversas evaluadas fueron síntomas y signos locales (dolor, rubor, infiltración local, prurito, necrosis y absceso) y generales (fiebre, febrícula, cefalea, lipotimia, náuseas, vómitos, rash y malestar general). Los resultados obtenidos demostraron la inocuidad de la vacuna, al no presentarse reacciones adversas graves. La febrícula y el dolor local ligero fueron los signos y síntomas que aparecieron en magnitudes aceptables. La fiebre apareció en un número reducido de voluntarios. Las reacciones adversas reportadas en los grupos vacunados con diferentes esquemas de la vacuna cubana y los inmunizados con la vacuna rusa fueron similares. La mayoría de los síntomas y signos desaparecieron a las 72 h. La seroconversión obtenida resultó similar a otras bacterinas contra la leptospirosis. Los resultados obtenidos permiten concluir que la vacuna es segura y poco reactogénica para adultos humanos